Supernatural conta a história de Sam Winchester (Jared Padalecki) e Dean Winchester (Jensen Ackles), dois irmãos que lutam contra criaturas cuja existência é desconhecida pela maioria das pessoas. Os irmãos perderam a sua mãe num incêndio que foi causado por circunstâncias sobrenaturais. Como resultado, o seu pai, John, dedicou a sua vida a viajar por todo o pais para tentar descobrir o que causou a morte da sua mulher e procurar vingança. Ele levou os seus filhos consigo, treinando-os para lutar contra o mal. Sam deixou a sua vida de caçador para ir para a Universidade de Stanford, enquanto Dean ficou com John para o ajudar a caçar. Quando o seu pai desaparece de repente, Dean pede ajuda a Sam para o encontrar, e os irmãos viajam pelo país, num Chevrolet Impala de 67 preto, investigando situações paranormais e outras ocorrências inexplicáveis, muitas delas baseadas na crença popular, mitos e lendas urbanas americanas e também criaturas baseadas em contos sobrenaturais como vampiros, lobisomens e fantasmas.